Для исследования анализов на предмет наличия в них тех или иных бактерий используются различные способы диагностики, в том числе и бактериоскопический метод. Особенности подобного метода, а также бактериологического метода исследования, будут рассмотрены в этой статье.
- Бактериоскопический метод диагностики
- Необходимые для исследования материалы
- Ход исследования
- Методы окраски образца
- Метод Грама
- Метод Циля-Нильсена
- Метод Леффлера
- Бактериологический метод
- Виды бактериоскопии анализов
- Бактериоскопия анализов кала
- Бактериоскопический метод анализа мочи
- Бактериоскопия мокроты
- Подведем итоги
Бактериоскопический метод диагностики
Бактериоскопический метод исследования образца предназначен для выявления микроорганизмов в исследуемом веществе, а также для подробного изучения свойств этих микроорганизмов, уточнении их количества и поведения в рассматриваемой среде. Достоинствами этого способа изучения анализов являются простота, быстрота проведения и доступность. Он может быть проведен практически в любой лаборатории с использованием минимального количества инструментов и химических реактивов. К его недостаткам можно отнести невозможность получения полной картины поведения микробов.
Необходимые для исследования материалы
Для изучения анализов чтобы применить бактериоскопический метод необходимы следующие инструменты:
- Металлическая петля.
- Предметное стекло. Этот предмет обязательно должен быть чист, так как любое его загрязнение может повлиять на состояние образца.
- Пинцет.
- Фильтровальная бумага.
Очистка новых предметных стекол производится с помощью 1%-ного раствора соды. После кипячения в таком растворе стекло промывается дистиллированной водой, слабым раствором соляной кислоты, а затем снова дистиллированной водой. Бывшие в употреблении стекла очищаются в несколько этапов: сначала их помещают в раствор серной кислоты на 60-120 минут, затем кипятят в растворе соды, после чего производится промывка стекла водой. После этого стекло опускают в медицинский спирт.
Хранить приборные стекла нужно либо в спирте, либо в плотно закрытых емкостях. Причем в последнем случае стекла должны быть сухими.
Для данного исследования также понадобятся следующие химические реактивы:
- Спирт;
- Раствор Люголя;
- Красители.
Наиболее часто используемыми красителями являются фуксин Циля, метиленовый синий и карболовый генцианвиолет. Последний краситель представляет из себя раствор обычного фуксина в пятипроцентной карболовой воде
Ход исследования
Исследовать культуру можно как в первозданном, так и в окрашенном виде. В последнем случае как колонии микроорганизмов, так и одиночные бактерии будут мертвы, что позволяет лучше ознакомиться со строением этих простейших организмов. При исследовании препарата в его первозданном виде, в свою очередь, лаборант получает больше информации об активности микробов. В обоих случаях препарат рассматривается при помощи микроскопа.
Окрашивание среды проводится в два этапа, сначала препарат подготавливают к процедуре и только затем его окрашивают. Подготовка образца проходит следующим образом:
- Образец, предназначенный для исследования, равномерно распределяется по приборному стеклу в форме круга или овала. При наличии в материале посторонних примесей (к примеру, гноя) перед добавлением исследуемого образца на стекло наносится 1-2 капли воды.
- После этого получившийся мазок следует высушить.
- Как только мазок высохнет, его необходимо зафиксировать с помощью пламени из горелки.
Для фиксации таким образом приборное стекло трижды проводится над пламенем. Если мазок зафиксирован достаточно прочно, то лаборант, проводящий эксперимент, почувствует жжение в пальцах.
По окончании данной процедуры проводится окрашивание образца.
Методы окраски образца
Окрашивание может быть простым, с использованием одного красителя. И сложным, при котором с целью точной дифференциации клеток бактерий по тем или иным их характерным признакам последовательно наносятся на образец несколько различных окрашивающих химических реагентов. Примером сложного окрашивания может служить методы Грама и Циля-Нильсена.
Метод Грама
Метод Грама позволяет определить химический состав клеточной мембраны. Благодаря этому методу была введена классификация бактерий по Граму: грамположительные бактерии (к которым относятся возбудители многих болезней) после окраски приобретают темно-фиолетовый цвет, а грамотрицательные – характерный красный оттенок. Метод Грама состоит из следующих этапов:
- Сначала препарат обрабатывают раствором Люголя на протяжении одной минуты.
- После обработки люголем образец обесцвечивают с помощью спирта.
- Затем препарат промывают дистиллированной водой и дополнительно окрашивают фуксином.
Метод Циля-Нильсена
Метод Циля-Нильсена применяется для определения кислоточувствительных бактерий, в клеточных мембранах которых содержится большое количество липидов, к примеру, возбудителей туберкулеза. Работа по данному методу проводится в пять этапов:
- На предметное стекло накладывают фильтровальную бумагу, на которую затем наносят небольшое количество фуксина Циля.
- Затем предметное стекло нагревают до появления характерного пара. После появления пара стеклу дают остыть. Данную процедуру повторяют еще два раза, после чего снова дают остыть стеклу.
- После этого дистиллированной водой смывают фуксин с приборного стекла, предварительно убрав бумагу.
- Затем стекло помещают в раствор соляной или серной кислоты до полной утраты образцом цвета.
- Наконец, на обесцвеченный препарат наносят раствор метиленового синего, стекло промывают дистиллированной водой и дают ему высохнуть для дальнейшего рассмотрения получившегося препарата под микроскопом.
Метод Леффлера
В число простых методов окрашивания входит метод Леффлера. При нем все бактерии приобретают синий цвет. Работа по данному методу проводится в два шага:
- На мазок кладется фильтровальная бумага, на которую наносится раствор метиленового синего Леффлера. В таком состоянии препарат оставляется на 3-5 минут.
- По прошествии данного промежутка времени препарат промывается водой и высушивается, после чего его можно исследовать под микроскопом.
При бактериоскопическом методе окрашиваются как минимум два препарата, причем один из них окрашивается простым методом, а один – сложным.
Бактериологический метод
Зачастую при исследовании анализов возникает необходимость определить чувствительность патогена к тому или иному препарату. В этом случае проводится исследование образца по бактериологическому методу. Данный способ состоит из следующих этапов:
- Сперва необходимо очистить культуру с целью выявить конкретные виды микробов. Для этого образец нужно поместить в среду, в которой развитие бактерий, которые нужно выявить, наиболее вероятно. Также возможно механическое разделение биоматериала при его посеве.
- После получения чистой культуры, взятые из нее образцы исследуются с помощью бактериоскопического метода.
Ниже приведены примеры сред, используемые для выявления микроорганизмов:
- Среда Эльшнига, состоящая из одной трети лошадиной сыворотки и двух третей бульона.
- Сыворотка Леффлера, которая используется для выявления возбудителей дифтерии. Такая среда состоит из трех четвертых сыворотки лошадиной или бычьей крови и одной четвертой бульона с содержанием 1% глюкозы.
- Кровяной агар, используемый для выявления стрептококков и проверки их чувствительности к воздействию антибактериальных препаратов. Данная среда состоит из 5-10% сыворотки крови животных и агара.
Виды бактериоскопии анализов
Бактериоскопия анализов кала
Для бактериоскопического исследования анализа кала необходим образец анализа пациента. Если необходимо провести анализ микрофлоры кишечника, нарушения в составе которой свидетельствуют о наличии дисбактериоза или инфекционных заболеваний пищеварительной системы, забор образца проводится с помощью петли, которая вводится в анальное отверстие примерно на 10 сантиметров вглубь.
При исследовании образца кала могут быть обнаружены следующие опасные микроорганизмы:
- Стафилококки.
- Клебсиелла, наличие которой свидетельствует о поражении толстой кишки.
- Синегнойная палочка, выделяющая крайне опасные для человека токсины.
Наличие синегнойной палочки в организме человека может привести к заражению крови и менингиту – заболеваниям, которые могут иметь летальный исход.
Бактериоскопический метод анализа мочи
Анализ мочи для бактериоскопического исследования сдается при подозрении на воспаление мочевыделительной системы и наличие таких болезней, как пиелонефрит и цистит, возбудителями которых являются кишечная палочка и некоторыми возбудителями заболеваний, передающихся половым путем, соответственно. Для такого исследования необходимо от 50 до 100 мл мочи, причем моча должна храниться в стерильном контейнере. Перед сдачей анализа необходимо хорошо подмыться, чтобы в моче было меньше сторонних примесей. Не рекомендуется сдавать мочу во время менструации.
Бактериоскопический метод анализа мочи незаменим для обнаружения заболеваний мочевыделительной системы у грудных детей. В этом случае моча собирается через катетер в стерильную емкость. Исследование образца мочи необходимо провести в кратчайшие сроки, иначе обнаружение возбудителей заболеваний будет затруднено.
Бактериоскопия мокроты
При анализе мокроты исследуются два мазка. Один из них изучается на предмет наличия палочек Коха – возбудителей туберкулеза. По результатам исследования второго делаются выводы о наличии в мокроте других микробов.
Для анализа мокроты на туберкулез проводится окрашивание образца по методу Циля-Нильсена.
Для анализа на предмет наличия других микробов образец окрашивают по методу Грама. С помощью бактериоскопического метода с применением окрашивания по методу Грама возможно выявление пневмококка – бактерии, являющейся причиной пневмонии. Также при работе с образцом по такой схеме можно выявить наличие в мокроте стрептококков – возбудителей ангины, а также золотистого стафилококка. Последний микроорганизм представляет особую опасность для здоровья человека. Он провоцирует гнойные процессы и образование абсцессов, в том числе и на внутренних органах.
Подведем итоги
Бактериоскопический метод диагностики является одним из основных методов исследования в микробиологии. Несмотря на его недостатки, данный метод широко применяется в современной медицине для диагностики самых разных заболеваний, некоторые из которых, к примеру, туберкулез, представляют особую опасность для человека.
Если вас заинтересовала тема этой статьи или у вас есть чем ее дополнить, оставьте свой комментарий. Если вам понравилась данная статья или вы просто интересуетесь микробиологией, вы можете поделиться ей в социальных сетях.